磁场里的纳米组合:培养神经元的毫秒级响应
MagTIES将磁性纳米盘与压电颗粒相连,培养细胞电压成像显示快速响应;小鼠杏仁核钙信号的频谱特征随磁场频率改变。
怎样把体外磁场转化为局部神经刺激,并让细胞迅速响应?发表于Advanced Healthcare Materials的研究,提出磁驱动扭矩电刺激MagTIES:磁性纳米盘在交变磁场中受到扭矩,带动与它连接的钛酸钡颗粒,作者希望借助压电相关效应,将这种机械作用转化为膜附近的电刺激。研究从材料在膜附近的排列出发,检验培养细胞响应,再走到小鼠杏仁核中的活动变化。一个纳米级组合,由此连接到神经调节的时间和频率问题。
培养细胞电压响应峰值相对控制信号平均延迟约12.3毫秒;活体杏仁核活动标记及钙信号增加,10、11、12 Hz磁场对应荧光频谱20、22、24 Hz增强。
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磁性纳米盘与压电颗粒,需要合适的位置
系统将磁性纳米盘MND与钛酸钡颗粒BTO连接,BTO位于细胞膜附近,MND在外侧。培养神经元受到交变磁场时出现钙响应;如果先后排列反过来,响应明显变小。材料在膜旁的空间关系,直接影响结果。
显微图像显示,两类颗粒分布在神经膜表面附近;荧光能量转移实验也支持它们处于近距离。把不同材料贴近并连在一起,是这个设计的关键:磁场作用的一端与靠近膜的一端,需要通过空间连接共同工作。
没有连接结构时,组合未引出同样响应;换成非压电颗粒或不同磁性材料,也没有重现相同效果。TRPC阻断条件下组合仍有响应,而钠、钙电压门控通道相关阻断使响应消失。这些对照支持作者提出的材料转导思路。
来源:Cheng CC et al. · Advanced healthcare materials · CC BY
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组合的两端,呈现不同尺寸关系
研究比较三种BTO颗粒尺寸。较小的100 nm颗粒与同一磁性纳米盘组合时,钙响应强于300和500 nm颗粒。作者将此与纳米尺度BTO的压电特性相联系,显示材料缩小并不只是为了更容易进入组织。
磁性纳米盘则呈另一种趋势:250 nm盘配合BTO时,响应强于135 nm盘。扭矩来源与压电响应材料各有自己的尺度特点;调节两端的组合,有助于改变细胞获得的刺激。
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从钙变化,进一步看到毫秒级电压事件
钙成像显示群体响应,电压成像则用于追踪更快的膜电位变化。研究在培养神经元中观察到,短时磁场期间可出现电压尖峰,从控制信号到尖峰峰值的平均延迟约12.3毫秒。
一个磁场周期包含两个方向的变化,都可能引出响应。报告的整周期触发成功率约三成,半周期约两成,提示响应具有概率性。磁性纳米盘单独使用等对照,在同样短脉冲条件下没有出现可检出的电压响应。
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杏仁核中,材料组合伴随活动标记增加
研究将材料局部送到雌雄小鼠杏仁核,再从体外施加交变磁场。含BTO与MND的组合,刺激侧相对另一侧的c-Fos活动标记比例,高于替换磁性纳米盘的对照;与单独MND的比较则未达到显著。材料在组织中的位置,也接近出现活动标记的区域。
改变两种材料的用量与比例,效果并非越多越大。一组较低MND比例的组合,标记比值高于两组等量比例组合;同一较低比例下,另外几种BTO用量间未见显著差异。材料配比因而是活体结果的一部分。
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场强改变,钙信号结果也改变
实时光纤记录中,50 mT、10 Hz磁场期间,BTO/MND组杏仁核钙荧光增加,对照组未见明显变化。降低到40、30或20 mT时,信号有上升趋势,但组内刺激前后比较未达到显著。
荧光信号的频谱中,10 Hz磁场对应20 Hz附近功率增强,较低场强时同样只有未显著趋势。研究由此继续改变磁场频率,观察这种频谱特点是否也随刺激节奏移动。
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荧光频谱的增强,跟着磁场节奏移动
磁场从10 Hz调到11、12 Hz时,BTO/MND组相对对照的增强分别出现在20、22、24 Hz附近,邻近比较频率未见同样差异。这个两倍频率关系,与每周期两个方向变化的刺激特点相呼应。
将刺激窗口缩短到五秒或一秒,频谱增强仍可随刺激窗口出现。体外快速电压事件与活体荧光的节奏变化,分别从时间和频率两个侧面展示这份纳米组合的调节特点。
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纳米尺度的安排,决定神经调节的表现
短期观察中,培养细胞死亡指标与注入后三天的小胶质、星形胶质标记,没有显示明显增加。材料长期留在组织中的变化,以及这些响应怎样影响具体行为,仍是这份技术需要继续回答的问题。
MagTIES把磁性纳米盘、压电颗粒和神经膜的局部关系,连接到可测的细胞响应。其亮点在于两种材料组合与排列的作用,以及快速电压和刺激相关荧光频谱这两层观察,为材料驱动神经调节建立了具体实验依据。